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雙特異性抗體結合了兩種抗體的特異性,使之可同時辨識/靶向不同的抗原或抗原表位。
在我們優化的構建中,抗體的結合區 (fragment-antigen binding, Fab) 被重新建置為單鏈可變片段 (single-chain variable fragment, scFv)。依此設計的抗體分子是由雙硫鍵共價結合的兩條延伸重鏈所組成,任一條重鏈的 N 端均為單鏈可變片段,中心部位是免疫球蛋白 g1 鏈的 CH2-CH3 結構,而 C 端則是一段短胜肽連接體。
以下是我們所構建之雙特異性抗體示意圖:

我們運用橋接酵素連結免疫吸附分析法 (bridging ELISA) 試驗,先固定 c-MET ECD-His 抗原,待 EGFR1/c-MET 雙特異性抗體被其辨識並捕捉後,再以 HRP 標記的第二抗原 EGFRvIII ECD-HRP 為檢測劑來偵測,以驗證 EGFR1/c-MET 雙特異性抗體是否具有雙重靶向能力。
試驗結果如下圖,EGFR1/c-MET 雙特異性抗體具有顯著的雙重靶向能力,其 EC50 值約為 0.56 nM。
